精子凝集试验测抗体

　　精子凝集试验从最初由 Kibrik等（1952年）创立的白明胶内精子凝集试验开始连同其后的发展，一共有 4 种：① 明胶凝集试验（Kibrik，1952）；② 试管玻片凝集试验（Franklin，Dukes，1964）；③ 毛 细 管 凝 集 试 验（Shulman，Hekman，Pann，1971）；④ 浅 盘 凝 集 试 验（Friberg，1974）。

　　（一）明胶凝集试验（gelatin agglutination test，GAT）

　　【准备】

　　（1）配制 Baker液（Bakersolution）

　　葡萄糖3.00gNa2HPO4·7H2O0.46g

　　NaCl0.20gKH2PO40.01g

　　加双蒸水至 100mL。

　　（2）用 Baker液配制 10% 白明胶溶液，并置 37℃ 水浴中备用。

　　（3）精子悬浮液：取正常新鲜精液（精子密度为 80×106/mL 左右，活动率 >60% ，a、b两级活动精子 >70% ），室温液化，用 Baker液稀释至 40×106/mL，置 37℃ 水浴中保存备用。

　　（4）待检血清及对照血清处理，均经 56℃ 水浴加热 30min，以灭活补体。随后用 Baker液，将两种血清均作 1∶4～ 1∶32倍数稀释，存放于 37℃ 水浴中备用。

　　【方法】

　　（1）取一定量的精子悬浮液，加入等量的 10% 明胶溶液，充分混合后，取 0.3mL 分别加入装有 0.3mL 对倍稀释血清的各支小试管内，并使其充分混合。

　　（2）将混合液分别用毛细吸管移置另一小试管（3mm ×30mm）内，37℃ 孵育 2h，移置 4℃放置 5min，待明胶凝固后，观察明胶内精子凝集情况，并判断结果。

　　【判断】

　　（1）阴性：精子在明胶内均匀分散，若以黑纸作背面对光观察，呈均匀乳白色，不见凝集块。

　　（2）阳性：精子成小凝集块，对光观察可见小凝集块有如雪花纷飞状，不难鉴别。

　　（3）抗体效价：以阳性反应的最高血清稀释倍数为血清凝集抗体效价。